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BUNSEN本生:血清使用時的一些注意事項

更新時間:2023-06-08    點擊次數:308

  BUNSEN本生:血清使用時的一些注意事項


  使用血清的時候,需注意的操作 :

  1、凍結血清時,請按照所主張的逐步凍結法(-20℃至4℃至室溫),若血清凍結時改變的溫度太大(如-20℃至37℃),試驗顯示十分簡單發生沉淀物。

  2、凍結血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,削減沉淀的發生。

  3、請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清會變得混濁,以致血清中許多較不穩定的成分也會因此遭到損害,而影響血清的質量。

  4、血清的熱滅活十分簡單形成沉淀物的增多,若非必要,能夠無須做此步驟。

  5、若有必要做血清的熱滅活,請恪守56℃,30 分鐘的原則,并且隨時搖晃均勻。溫度過高,時間過久或搖晃不均勻,都會形成沉淀物的增多。

  一、儲存條件

  血清一般儲存于-20 ℃,同時應避免反復凍融。若存放于 4 ℃ 時,請勿超過一個月。

  二、血清中絮狀沉淀的處理

  沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白,這是正常特性,不會影響產品性質。

  離心血清(400 g,1-2 分鐘)或簡單的讓其沉淀在瓶子底部,將血清小心的轉移到另一個無菌瓶里。

  大多情況輕輕搖動沉淀并加熱至 37 ℃就會再溶解。

  一般不建議采用過濾的方法除去沉淀,因為沉淀會堵塞濾膜而無法過濾。

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  三、使用濃度

  一般為 5-20 % ,是 10 %。過多血清容易使培養中的細胞發生變化,特別是一些二倍體的無限細胞系,迅速生長之后容易發生惡性轉化。

  四、解凍方法

  血清從冰箱取出后應慢慢地解凍。最好在 4 ℃ 低溫冰箱里放置一天或直到融化為止。如果時間不允許低溫解凍, 可參考以下解凍方法:

  1. 將血清從冰箱里取出后,在室溫下放置 15-20 分鐘。

  2. 然后將血清放置在 37 ℃ 水浴槽里。過高溫度會導致血清出現渾濁現象。不要讓水淹沒裝有血清的瓶子。

  3. 每隔 5 分鐘左右適當搖晃瓶子,直到地解凍為止。

  五、熱滅活方法

  加熱可以滅活補體系統。激活的補體參與溶解細胞事件,刺激平滑肌收縮,細胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學研究,培養 ES 細胞、平滑肌細胞時,推薦使用熱滅活血清。若必須做血清的熱滅活,請遵守56 ℃,30 分鐘的原則,并且隨時搖晃均勻。血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。

  1. 用上述描述的方法將血清在低溫冰箱或室溫下解凍。

  2. 在血清解凍時,將一個容器裝入適量的水,用于模擬裝有血清瓶子在熱處理過程中檢測瓶內水的溫度。容器大小、質地和裝水的量最好與裝血清的瓶子相同或相似。

  3. 待血清解凍時,將含有血清的瓶子放在預熱的 56 ℃水浴里,不要將含有血清的瓶子讓水淹沒或接近瓶子的蓋子,以免導致污染。

  4. 在開始加熱處理時,要及時使用溫度計測定模擬瓶內水的溫度。

  5. 在預熱期間,每隔 3-5 分鐘要適當搖晃含有血清和水的瓶子,確保瓶內液體均勻加熱。

  6. 一旦模擬瓶內的水溫達到 55.8± 0.5 ℃時,開始計時,并在此溫度范圍內熱處理 30 分鐘,然后立即放在冰上冷卻。

  為防止在熱處理過程中由蛋白質變性而導致的渾濁和沉淀現象,熱處理時應注意下列事項:

  1. 不要用高于 25 ℃ 以上的溫度加快解凍速度。

  2. 在熱處理之前,要使血清融解。

  3. 不要使熱處理的溫度高于 56.3 ℃

  4. 熱處理時間不要長于 30 分鐘。

  5. 在加熱過程中一定要定時搖動血清。

  六、避免事項

  1.避免反復凍融

  長時間儲存在 2-8 ℃ 時,血清中的各種蛋白和脂蛋白可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。

  2.避免產生沉淀

  解凍血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發生。

  血清分裝時,須規則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一。

  勿直接由 -20 ℃ 直接至 37 ℃ 解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質凝結而發生沉淀。

  勿將血清置于 37 ℃ 太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中許多較不穩定的成份也會因此受到破壞,從而影響血清的品質。

  七、建議事項

  一旦您在新鮮培養基中添加了血清和抗生素時,您應該在兩到三周內使用它。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解。

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